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表观生物学

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RIP-seq

 技术简介:

        RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白相互结合的一门技术,是了解转录后调控网络动态过程的的一种工具,能帮助发现miRNA的调节靶点。RIP技术利用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀,再经过纯化分离就能对结合在复合体上的RNA进行分析。RIP是染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同(如复合物不需要固定,RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不可以含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证)。RNA免疫共沉淀测序(RIP-seq),将RIP与高通量测序技术结合起来,在基因组范围内发现与蛋白或蛋白复合物相结合的RNA。   

技术 流程:

a)细胞:5×108
b)组织:500 mg
c)IP后的RNA: >1μg,

样品运输及保存: 

样品运输:样品置于1.5mL离心f管中,封口膜封好,干冰运输。 
样品保存:细胞样品或新鲜组织块液氮冻存后-80℃保存。
 

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