ECL
产品描述:
ECL化学发光超敏显色试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。其原理是,蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液,室温孵育膜数分钟,将印迹膜于曝光条件下曝光。
本产品采用新型底物系统,降低曝光背景,提高检测灵敏度,同时提高试剂盒的稳定性。主要用于WB检测以及化学发光免疫检测系统。
优势:
● 极高灵敏度:可检测低至10-100pg级的抗原
● 极高信噪比:优化配方,背景极低
● 极高性价比:节省一抗和二抗,缩短实验周期
● 极高稳定性:持续发光时间长,4℃条件下保存时间可达6个月以上
实验步骤:
1. 完成电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜后。常温操作即可。
【注】:ECL发光液是HRP的显色底物,因此检测系统最终必须基于HRP酶标记。
2.配制新鲜发光工作液:分别取等体积的A液和B液,混匀,室温放置备用。
【注】:取A液和B液一定要换用不同枪头,以免主要成分失效;建议配制完毕后立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3. 取出膜,轻触在滤纸上吸去多余洗液(勿使膜完全干燥)。将膜完全浸入发光工作液中,与发光工作液充分接触。室温孵育1分钟,准备立即压片或曝光。
【注】:孵育时间不能过长,可能导致曝光条带异常。
4. 用镊子夹起膜,轻触吸水纸,去除膜上多余的液体,保持膜湿润即可。
5.将膜迅速置于曝光平板,进行曝光检测。
【注】:曝光时间需根据曝光强度做相应的调整。
注意事项:
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免。
3)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
4)由于发光液灵敏度高,抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败,所以要适度优化抗体浓度。
5)叠氮化钠(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。
6)本品无特殊毒性,按普通化学品处理。