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广谱启动

一、常规的广谱启动子
基因递送方式通常有这么两种:(1)通过非病毒基因转移技术使用化学和物理方法将DNA传递到细胞中;(2)通过病毒基因转移技术使用病毒载体将基因转移到细胞中。特别是第二种方法,在基因治疗中使用尤为广泛,越来越多的病毒载体用于到基因治疗中,我们常见的有慢病毒载体,腺病毒载体,腺相关病毒载体等等。我们知道一个载体通常都由自己的启动子,标签,荧光蛋白标记,真核抗性筛选标记等这些元件组成,而且每种元件都会有不同的连接方式,那今天小编就简单介绍如何选择这些元件,希望通过这篇文章能够帮助您选择合适,正确的载体。
 
一、启动子
启动子是指一段能使特定基因进行转录的DNA序列。启动子可以被RNA聚合酶辨认,并开始转录合成RNA。在RNA合成中,启动子可以和调控基因转录的转录因子产生相互作用,控制基因表达(转录)的起始时间和表达的程度,包含核心启动子区域和调控区域,就像“开关”,决定基因的活动,继而控制细胞开始生产哪一种蛋白质。启动子位于控制基因表达的调控序列中、基因转录起始位点的上游(朝向DNA正义链的5′方向),长约100~1000个碱基对。启动子本身并无编译功能,但它拥有对基因翻译氨基酸的指挥作用,就像一面旗帜,其核心部分是非编码区上游的RNA聚合酶结合位点,指挥聚合酶的合成,这种酶指导RNA的复制合成。因此该段位的启动子发生突变(变异),将对基因的表达有着毁灭性作用。启动子代表一些重要的元件可以与其他调节区域(如增强子、沉默子、边界元件或绝缘子)合作一致,以主导基因转录的水平。
组成型/广谱启动子:组成型启动子是在组成型启动子的调控下,不同组织器官和发育阶段的基因表达没有明显差异。组成型启动子的调控不受外界条件的影响,所启动基因的表达具有持续性,但不表现时空特异性,亦称之为非特异性表达启动子。常见组成型启动子如下:
启动子名称 启动子表达丰度及应用
UbC 中低丰度,于细胞、原代细胞、离体神经元
EFla 强丰度,于细胞、血液来源细胞
CMV 强丰度,肿瘤细胞、原代细胞
SV40 中丰度
U6 shRNA或microRNA 表达
PGK 中低丰度
PGK 中低丰度
CAG 强丰度,干细胞、原代细胞
CBG 强丰度
常用的广谱启动子包括CMVCAGCBGEFIα、U6。

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