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sgRNA
CRISPR/Cas9技术的核心在于crRNA（CRISPR RNA）和tracrRNA（trans-activating CRISPR RNA）的巧妙协作。这两条单链RNA分子，其中crRNA源自pre-crRNA的剪切，而tracrRNA则是由tracrRNA基因转录而来。它们之间通过一段互补序列紧密相连，在与Cas蛋白携手后，共同构成了由crRNA精准导航的核酸内切酶复合物。有研究表明，当crRNA与tracrRNA被巧妙地融合成一条单一的RNA链时，其依然保持着对双链DNA的高效剪切能力。这条经过精心设计的单链RNA，便是我们熟知的单向导RNA（single guide RNA, sgRNA）。传统上，sgRNA的合成主要依赖于质粒转染、体外转录等方法。然而，这些方法在制备成功率上往往波动较大，且有可能对细胞造成毒性，从而在一定程度上限制了它们的应用范围。相比之下，通过化学方法合成sgRNA，不仅能够有效规避上述难题，还能确保sgRNA的纯度和稳定性，为CRISPR/Cas9技术在基因编辑领域的更广泛应用奠定了坚实的基础。
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