客服电话：13636671697

服务项目/SERVICE

腺病毒包装

首页 > 现货产品 > > 腺病毒包装

溶瘤病毒

部分现货：

 Ad-hTERTp-E1A-EGFP溶瘤腺病毒
      溶瘤病毒(Oncolytic virus)：是优先感染或在肿瘤细胞内复制，可以杀死肿瘤细胞的一类病毒。初期，部分肿瘤细胞被溶瘤病毒特异性感染和破坏。随后，溶瘤病毒在肿瘤细胞内进行复制和增殖，释放出新的感染性病毒颗粒感染和破坏其他肿瘤细胞。溶瘤病毒通过直接溶解肿瘤细胞或者刺激宿主产生抗肿瘤免疫反应来发挥溶瘤的功效。
 
溶瘤腺病毒感染：
      溶瘤腺病毒纤维蛋白中的knob结构域识别并结合细胞表面的柯萨奇受体（CAR），通过胞吞作用（endocytosis）内化（internalisation）进入细胞。进入细胞后，在五邻体基底部的帮助下，病毒从内涵体（endosome）中逸出，转移至核孔复合体，将病毒DNA释放到宿主细胞核中，转录开始进行。病毒基因组的转录、复制和病毒的包装均在宿主细胞核中进行。



腺病毒的操作
收到病毒后的处理
（一）、腺病毒的储存
1、腺病毒采用冰袋运输。
（1）、收到病毒液后如未融化请置于-80℃冰箱，下次使用时再进
行分装；
（2）、如客户收到时腺病毒已融化，请直接分装后置于-80℃冰箱
保存；若短期内用于实验，可分装部分于4℃保存（尽量一周内用完）。
2、尽量避免反复冻融，否则会降低病毒滴度（每次冻融会降低病
毒滴度10%）。建议不要在-20℃下长期保存。如果病毒储存时间超
过6个月，应该重新测定病毒滴度。
3、建议收到病毒产品后根据实验需求自行分装或购买经过分装的
小包装病毒产品（购买时请提出）。
（二）、腺病毒的稀释
需要稀释病毒时，将病毒取出后置于冰上融解，使用培养目的细胞用PBS 或培养基稀释到所需浓度后混匀分装后4℃保存，并尽快用于实验（尽量一周内用完），动物实验建议使用注射用平衡液来稀释，
并尽快用完。感染目的细胞
由于腺病毒是自主复制性基因载体，不能插入基因组稳定遗传，
因此实验中细胞感染腺病毒的实验需要具体情况具体对待。一般根据
外界刺激处理的时间来选择感染腺病毒的时间，短时程处理（一周之
内）建议先感染腺病毒之后再进行处理，长时程刺激的建议在刺激结
束前2~3 天进行腺病毒感染。另外不同细胞的MOI 不同，所以在将
病毒感染正式感染目的细胞前，需要做一个预实验以确定目的细胞中
加入的病毒数。
（一）细胞准备
将状态良好的目的细胞接种到24 孔板，使细胞浓度为1×105/ml
细胞，接种细胞数量因细胞的生长速度而略有不同，一般是保证第二
天进行病毒感染的时候细胞汇合率介于50%至70%直接。
（二）病毒感染
I、贴壁细胞
由于该病毒感染后续拍照需要进行自噬小点的计算，因此需要在
高倍镜下拍照，条件允许最好使用共聚焦显微镜拍照，此时需要把细
胞铺被在玻片上面（部分细胞铁壁能力不是很强，此时需要预先在玻
片上包被galetin 甚至laminin）。感染实验在1/2 体积培养液感染。加入的病毒量范围在MOI=50～100 内，每个MOI 值加两个孔6小时后换液。
II、悬浮细胞
上面介绍的是针对贴壁细胞的感染方法，若是悬浮或半悬浮细
胞，则需要通过平角离心转染法，即将适量的病毒液加入细胞培养皿
后，封好口，放入平角离心机后，低速离心1h，然后放入培养箱中
正常培养即可。若由于实验条件有限，没有平角离心机，可用离心管
代替，将细胞吹打吸入离心管中，进行低速离心，去掉大部分上清，
然后加入适量的病毒液，室温放置10min（不能超过半小时），然后
将细胞和病毒液同时吸出转入培养皿中继续病毒感染至6小时后换
液即可。
（三）观察感染情况
感染24小时后，可以开始观察到GFP以及 mCherry表达，36-48小时可以进行细胞固定、封片（需要使用防淬灭的固定剂）、拍照分析。
 
实验操作注意事项：
1、操作病毒时请尽量使用生物安全柜；
2、操作时需戴上帽子，佩戴双层手套，双层口罩；
3、病毒操作中绝对禁止在安全柜内有任何皮肤直接暴露的情况；
4、剩余的病毒和接种用的注射器等耗材需高压灭菌后才能扔弃；
5、操作完毕要及时用肥皂和水洗手消毒。
 


Copyright © 2019 All Rights Reserved.版权所有 沪ICP备15008925号-1

试用装免费申请

X