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工具慢病毒

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定位示踪

 

      细胞是一个高度有序的结构,细胞内根据不同功能和空间分布可分为若干细胞器或区域,包括细胞核、高尔基体、内质网、线粒体和细胞膜等。蛋白质在核糖体中合成后,会根据其分选信号被运送到特定的细胞器中,部分蛋白质则被分泌到细胞外或留在细胞质中。只有在正确的位置,蛋白质才能发挥其功能,参与细胞内的各种生命活动。因此,蛋白质的亚细胞定位研究具有重要意义。
亚细胞定位
亚细胞定位研究旨在确定生物大分子在细胞内的具体位置,如细胞核、细胞质或细胞膜。蛋白质在细胞质中合成后,通过分选信号被导向特定的亚细胞结构,以参与多种生命活动。该研究对理解细胞功能、信号传导、代谢过程及疾病机制等至关重要。
应用领域
疾病研究:通过研究亚细胞定位的变化,揭示疾病的发生机制,如癌症和神经退行性疾病等。
药物开发:了解药物在细胞内的分布及作用机制,为药物设计提供依据。
研究方法
免疫荧光法
直接法:将标记有荧光的特异性抗体直接添加到抗原样本上,染色后去除未结合的反应,然后去除未反应的抗体,再加入带荧光标记的抗抗体(第二抗体)与样本反应,形成抗体-抗原-抗体复合物。最后洗去未结合的标记抗体,封片后镜检。如果检测未知抗体,则样本中的抗原已知,而第一抗体为待检血清。
融合报告基因法
通过将目标蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)或β-葡萄糖苷酸酶(GUS)等报告基因融合,由目标蛋白的导向信号进行亚细胞定位。利用报告蛋白的荧光信号可以追踪目标蛋白的定位,是目前应用最广泛的蛋白质亚细胞定位方法。
生物信息学预测法
细胞器具有不同的理化特征,决定了它们对蛋白质的选择性。蛋白质表面暴露的理化特征是其亚细胞定位的重要依据,因此通过分析蛋白质的氨基酸组成可以预测其亚细胞定位。
亚细胞结构分离定位法
通过超速离心等技术分离各亚细胞结构,进一步提取其中的蛋白质进行分析,以确定其定位。该方法适合蛋白质组水平的细胞器定位研究,常与双向凝胶电泳和质谱技术结合使用。

慢病毒 线粒体定位慢病毒(mito-zsGreen/mcherry)
慢病毒 核定位慢病毒(NLS-zsGreen/mcherry)
慢病毒 微管定位慢病毒(tublin-GFP/cherry)
慢病毒 自噬慢病毒GFP/RFP-LC3B
慢病毒 荧光素酶慢病毒Luciferase-GFP-puro
慢病毒 荧光素酶慢病毒GFP-Luciferase
慢病毒 荧光素酶慢病毒Luciferase-puro
慢病毒 荧光素酶慢病毒mCherry-Luciferase-Puro
慢病毒 荧光素酶慢病毒Mcherry-Luciferase
慢病毒 荧光素酶慢病毒Luciferase-Blasticidin
慢病毒 荧光素酶慢病毒Luciferase--Neo
慢病毒 荧光素酶慢病毒YFP-T2A-LucLuciferase
慢病毒 荧光素酶慢病毒CFP-T2A-LucLuciferase
慢病毒 CAS9慢病毒Lenti-crispr-v2-NC
慢病毒 绿色荧光慢病毒(Lenti-zsGreen/copGFP)
慢病毒 红色荧光慢病毒(Lenti-cherry)

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