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产品手册

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◆ 分子生物学操作说明

 分子生物学服务说明书
尊敬的客户:
您好!感谢您对公司的信赖与支持。
为了让您更加方便,更加准确的使用我公司提供的服务,请您阅读以下服务说明:
I.质粒:
尊敬的客户,如果您的产品是质粒,请阅读以下说明。
公司对提供的含有目的基因的重组质粒进行了真空冷冻干燥,干燥后的质粒在离心管底部一般呈薄
膜状或是无色透明,使用前请小心开启,以免丢失质粒。
1、我公司提供的质粒总量约为 2~5μg,建议用20~50μl 灭菌后的双蒸水或 pH8.0 的 1*TE 缓冲液来溶解,
溶解后的质粒浓度约为 100 ng/μl。 您也可以根据您当前的实验需要来溶解质粒。
2、溶解后的质粒若长期不使用请于-20℃保存,并请避免反复冻融以防质粒降解。
3、提供的质粒满足一般的分子生物学实验要求,如 PCR 扩增、酶切连接、质粒转化和质粒 DNA 测序
等。如果你对质粒选择其它的发货形式(液体质粒、滤纸质粒
使用说明如下:
A、液体质粒:可根据实验需求直接使用
B、滤纸质粒:a. 在超净工作台中将滤纸画圈部分剪下(多剪一点)
,然后剪碎;
b. 将剪下的滤纸放入 EP 管中;
c. 用50ul TE 或双蒸水浸泡半小时后离心集液
尊敬的客户,如果您的产品是基因片段的质粒发货,请阅读以下说明。
公司会根据合同要求/客户需求,提供相应的基因片段的质粒发货, 基因片段的质粒发货量按合同要求/
客户需求提供,目前无默认值。其他的使用详情,请参照质粒的说明。
II. PCR产物:
尊敬的客户,如果您的产品是PCR产物,请阅读以下说明。
公司对提供的含有目的基因的PCR产物进行了真空冷冻干燥,干燥后的PCR产物在离心管底部一般呈薄膜状
或是无色透明,使用前请小心开启,以免丢失质粒。
1、我公司提供的PCR产物约为500ng,建议用20μl灭菌后的双蒸水或 pH8.0 的 1*TE 缓冲液来溶解,溶解
后的质粒浓度约为25 ng/μl。 您也可以根据您当前的实验需要来溶解质粒。
2、溶解后的PCR产物容易降解,请注意实验前的检测,若长期不使用请于-20℃保存,并请避免反复冻融以
防PCR产物降解。
3、提供的PCR产物满足一般的分子生物学实验要求,如 PCR 扩增、酶切连接、DNA测序等。III.甘油菌/穿刺菌:
尊敬的客户,如果您的产品是菌液,请阅读以下说明。
我公司同时提供一管含有目的基因的重组质粒的穿刺菌或是甘油菌约 500 μL 备用,宿主菌的名称已经在
标签上注明。
1、 甘油菌可室温保存,保存周期约为 1 周,也可-20℃保存,保存周期约为 1 年;穿刺菌可在 4°保存
一个月
2、甘油菌的使用:根据质粒的抗性来进行扩大培养,先加入一定量的抗生素,再吸取 100-200 μL 甘油菌
接种到液 体培养基中扩大培养。
3、穿刺菌的使用:拿到的穿刺菌可以看到明显的穿刺线,挑取穿刺线上的菌接种到相应的培养基中 37℃
过夜培养 即可。
特别说明:
如果您收到的菌液的感受态是EPI400,请注意诱导剂的使用。
EPI400 菌株使用说明
质粒转化:
1.取出 EPI400 感受态细胞放于冰盒上,且冰盒温度降于 0℃以下,使 EPI400 感受态细胞融化;
2.将质粒(100μl EPI400 感受态细胞中转入 10μl 样品),轻弹几秒,使混匀(尽量不要用手触摸感受
态);
3.置于冰上,冰浴 30min,取出;
4.42℃水浴热激 90 秒;
5.再置于冰上,冰浴 2-3min,取出;
6.加入 600-700μl 的无抗 LB 培养基,37℃摇床培养,50~70min;
7.取出,置于离心机 5000rpm 离心 5min,抽去上层清液,剩余 100uL 吹打混匀后涂于相应抗性的平板
上,37℃过夜培养。
单克隆摇菌:
1.用灭菌的牙签或者 Tip 吸管挑取单菌落,加入到 4ml 含有 1‰相应抗性的 LB 培养基的单管中,置于
摇床中,37℃,200rpm 过夜培养,得到母液;
2.吸 取 50~100μl 菌的母液,加入到 4ml 含有 1‰ 相应抗性和 1‰ 诱导剂(CopyCutter Induction
solution)的 LB 培养基的单管中,置于摇床中,37℃,200rpm
过夜培养。

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