Cre/Flp
Cre依赖——Cre-LoxP系统
Cre(Cyclization Recombination Enzyme)是一种由大肠杆菌噬菌体P1编码的蛋白质,包含343个氨基酸,分子量约为38 kDa。Cre不仅具有催化功能,还能特异性识别loxP位点,与限制酶作用类似。loxP(locus of X-over P1)位点长34 bp,包括两个13 bp的反向重复序列和一个8 bp的间隔区。反向重复序列是Cre重组酶的特异性识别区域,间隔区则决定loxP位点的方向。
(1)Cre-LoxP系统的基因重组方式
Cre-LoxP系统是一种位点特异性的基因重组技术,广泛应用于基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位。Cre重组酶可识别loxP位点并在其间诱导基因重组,重组结果取决于两个loxP位点的方向。主要方式包括:
若两个loxP位点位于同一DNA链上且方向相同,Cre重组酶会删除两者间的序列;
若两个loxP位点位于同一DNA链上但方向相反,Cre重组酶会翻转两者间的序列;
若两个loxP位点位于不同的DNA链或染色体上,Cre重组酶可促使两条DNA链发生交换或染色体易位;
若在两条DNA链或染色体上分别有四个loxP位点,Cre重组酶可诱导位点间序列互换。
(2)Cre-LoxP系统的优势
时空特异性:通过特定启动子或调控基因实现;
高效性:不受靶基因大小或位置限制;
准确性:动物模型中未见非特异重组;
快速性:能在受精卵分裂前完成。
Flp依赖——Flp-FRT系统
FLP(flippase)也是一种位点特异性的DNA重组酶,克隆自酿酒酵母,含423个氨基酸。Flp重组酶作用于包含48 bp反向重复序列的FRT位点,一些突变FRT(如F3)也能被识别,但仅能与相同序列发生重组。
Cre(Cyclization Recombination Enzyme)是一种由大肠杆菌噬菌体P1编码的蛋白质,包含343个氨基酸,分子量约为38 kDa。Cre不仅具有催化功能,还能特异性识别loxP位点,与限制酶作用类似。loxP(locus of X-over P1)位点长34 bp,包括两个13 bp的反向重复序列和一个8 bp的间隔区。反向重复序列是Cre重组酶的特异性识别区域,间隔区则决定loxP位点的方向。
(1)Cre-LoxP系统的基因重组方式
Cre-LoxP系统是一种位点特异性的基因重组技术,广泛应用于基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位。Cre重组酶可识别loxP位点并在其间诱导基因重组,重组结果取决于两个loxP位点的方向。主要方式包括:
若两个loxP位点位于同一DNA链上且方向相同,Cre重组酶会删除两者间的序列;
若两个loxP位点位于同一DNA链上但方向相反,Cre重组酶会翻转两者间的序列;
若两个loxP位点位于不同的DNA链或染色体上,Cre重组酶可促使两条DNA链发生交换或染色体易位;
若在两条DNA链或染色体上分别有四个loxP位点,Cre重组酶可诱导位点间序列互换。
(2)Cre-LoxP系统的优势
时空特异性:通过特定启动子或调控基因实现;
高效性:不受靶基因大小或位置限制;
准确性:动物模型中未见非特异重组;
快速性:能在受精卵分裂前完成。
Flp依赖——Flp-FRT系统
FLP(flippase)也是一种位点特异性的DNA重组酶,克隆自酿酒酵母,含423个氨基酸。Flp重组酶作用于包含48 bp反向重复序列的FRT位点,一些突变FRT(如F3)也能被识别,但仅能与相同序列发生重组。
Flp | rAAV-mDlx-NLS-Flpo |
Flp | rAAV-CMV-SV40 NLS-Flp |
Flp | scAAV-CMV-DIO-Flp |
Flp | scAAV-hSyn-SV40 NLS-Flp |
Flpo | rAAV-EF1α-DIO-mWGA-Flpo |
Flp | rAAV-EF1α-DIO-Flp-P2A-mCherry |
Flp | rAAV-CAG-FLEX-Flp |
Flp | rAAV-hSyn-SV40 NLS-Flp |
Flp | rAAV-hSyn-Flp |
Flp | rAAV-hSyn-SV40 NLS-Flp |
Flp | rAAV-hSyn-Flp-EGFP |
Flp | rAAV-CAG-DIO-WGA-Flp |
Flp | rAAV-EF1α-DIO-Flp |
Flp | rAAV-EF1α-DIO-Flp-T2A-EGFP |
Flp | rAAV-fSST-SV40 NLS-Flp-bGH polyA |
Flp | rAAV-fPV-SV40 NLS-Flp-bGH polyA |
Flp | rAAV-mDlx-NLS-Flpo |
Flp | rAAV-CaMKIIα-SV40 NLS-Flp |
Flp | scAAV-CMV-DIO-Flp |
Flp | rAAV-hSyn-DIO-Synaptophysin-pHoran4-P2A-Flp |
Flp | rAAV-hSyn-SV40 NLS-Flp-P2A-mCherry |
Flpo | rAAV-EF1α-DIO-mWGA-Flpo |