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细胞增殖
CCK8检测细胞增殖
服务简介
CCK8是检测细胞增殖和细胞毒性的一种方法。实验原理:WST-8电子耦合试剂可被线粒体脱氢酶还原成高度水溶的橙黄色物质,颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,通过比色法可以间接反映活细胞数量。
 
技术应用
 
药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验及生物因子的活性检测等。
 
技术优势
 
1、酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰;
     
2、细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间;
     
3、检测时间短;   
     
4、非常适合批量样品检测;
     
5、检测试剂很稳定。


MTT检测
MTT实验方案概述
MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,在活细胞中作用于线粒体的呼吸链,MTT在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下生成蓝色的formazan结晶,formazan结晶的生成量与活细胞数目成正比,生成的formazan结晶可溶解在DMSO中,利用酶标仪测定570 nm处的光密度OD值,可以反映出活细胞数目和细胞活力。死细胞中由于没有琥珀酸脱氢酶,因此不能还原MTT生成formazan结晶。

MTT实验方法优缺点
优点:经济、灵敏度高,可用于大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
缺点:由于MTT经还原所产生的formazan结晶产物不溶于水,需有机溶剂溶解后才能检测,这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且有机溶剂对实验人员也有损害技术服务内容。
常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是永久转染,前者转染的外源DNA不整合到宿主染色体中、通常表达只持续几天,一般在转染24-72小时后检测。后者转染的外源DNA将整合到宿主染色体中、可持续性的表达,一般可用于稳定细胞株的构建。

细胞转染
细胞转染的基本原理将外源DNA克隆到载体上后导入细胞,表达载体上的目的片段,从而使目的基因在细胞中发挥功能。目前转染方法有多种,如脂质体转染法、磷酸钙-DNA共沉淀法、电穿孔转染法、腺病毒感染等。

常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是永久转染,前者转染的外源DNA不整合到宿主染色体中、通常表达只持续几天,一般在转染24-72小时后检测。后者转染的外源DNA将整合到宿主染色体中、可持续性的表达,一般可用于稳定细胞株的构建。 
 
细胞转染概述
细胞转染的基本原理将外源DNA克隆到载体上后导入细胞,表达载体上的目的片段,从而使目的基因在细胞中发挥功能。目前转染方法有多种,如脂质体转染法、磷酸钙-DNA共沉淀法、电穿孔转染法、腺病毒感染等。

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