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服务项目/SERVICE

蛋白互作

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亲和纯化

                                                           亲和纯化(AP-MS)

实验目的

寻找靶蛋白的互作蛋白

AP/MS服务简介
与常规Co-IP实验类似,只是亲和纯化法可不用引入抗体。将标签(如SBP)与特定基因融合表达,融合蛋白用链霉亲和素(strep)磁珠亲和纯化,经生物素洗脱,即可得到蛋白复合物。将实验组和对照组的洗脱蛋白分别做质谱,在实验组结果中扣除对照组中的蛋白,即可鉴定出与靶蛋白互作的蛋白。

服务内容

1、构建含SBP标签的靶基因表达载体质粒;
2、目的细胞中过表达带标签的诱饵蛋白,细胞裂解液做WB检测表达效果;
3、用strep微珠进行蛋白复合物的纯化和洗脱;
4、实验组和对照组的洗脱液分别用胰酶酶解;
5、LC-MS/MS,获得蛋白质的定性信息;
6、结果分析与报告整理。

技术流程图



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