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蛋白质谱

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ItraqTMT标记定量

技术简介

 iTRAQ(Isobaric tags for relative and absolute quantification)是由美国ABI研发的一种体外同种同位素标记的相对与绝对定量技术。TMT(Tandem mass tags)则是由Thermo研发的多肽体外标记技术。两种技术都是采用4种或8种同位素编码的标签,通过特异性标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,而后进行串联质谱分析,可同时比较2~8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。iTRAQ和TMT的原理都是等重标签标记,化学反应原理和用来定量的原理都是一致的,只是化学结构略有不同。同位素试剂标记多肽氨基基团后,等量混匀多肽并进行LC-MS/MS分析。一级质谱中,不同样品来源的同一肽段表现出相同的m/Z;二级质谱中,化学键断裂释放出报告离子,低质量区的报告离子强度反映了该肽段在不同样品中的相对表达量,高质量区的肽段碎片离子m/Z反映了该肽段的序列信息。质谱原始数据经过数据库检索,即可得到样本中所含蛋白及其表达差异。

技术流程

仪器设备

•Thermo Scientific Q Exactive HF-X
•Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos
•Thermo Scientific Q Exactive
 

技术优势

1/高通量:8-plex iTRAQ试剂盒和16-plex TMT试剂盒可同时标记最多8组或16组样本;
2/适用范围广:几乎可对任何物种的各类蛋白质进行分离鉴定,不受蛋白大小或酸碱性等因素影响;
3/灵敏度高:低丰度蛋白也能检出;
4/定量准确:不同标记的肽段等量混合后上机,避免技术误差,提高检测效率。
 

应用范围

►基础医学:疾病标志物,疾病标志物筛选,发病机制,疾病分型等;物种蛋白质草图构建。
►生物医药:药物机理,药效评价,药物开发,药物作用靶点研究,标志物,发病机制,疾病分型等;
►农林畜渔:抗逆胁迫,生长发育,耐药,植物胁迫,抗逆研究和致病机理等。
 

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