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蛋白质谱

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SILAC

技术简介

SILAC ( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技术是利用哺乳动物细胞增殖对必需氨基酸的依赖性原理而设计的代谢标记蛋白质的方法。SILAC技术应用于定量蛋白质组研究,为全面、系统地定性和定量分析复杂哺乳动物细胞蛋白质组提供了有效的方案,是目前较先进的、进行细胞中蛋白质相互作用和蛋白质表达差异的定量蛋白质组学技术。其检测原理是:利用含轻、中或重型同位素标记的必需氨基酸(主要是Lys和Arg)培养基培养细胞,标记细胞内新合成的蛋白质,培养7代以上,细胞中几乎所有蛋白质都被标记。不同处理的蛋白样品等量混合,经胰酶酶解和LC-MS/MS分析即可得到肽段及蛋白的定性和相对定量结果。

技术流程




仪器设备

•Thermo Scientific Q Exactive HF-X
•Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos
•Thermo Scientific Q Exactive
 

技术优势

1/标记效率高:非放射性同位素氨基酸对细胞蛋白质进行体内标记,标记效率几乎可达100%;
2/定量准确性极高:各组蛋白标记混合,酶解和检测均在同一管中进行,避免了操作误差;
3/灵敏度高:采用高分辨率的质谱仪检测,低丰度蛋白也能检出。
 

应用范围

►基础医学:疾病标志物,发病机制,疾病分型等;
►生物医药:药物机理,药效评价,药物开发等。

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