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肿瘤整体研究

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肿瘤整体研究

肿瘤是机体在各种致癌因素作用下,局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控,导致其克隆性异常增生而形成的新生物。一般认为,肿瘤细胞是单克隆性的,即一个肿瘤中的所有瘤细胞均是一个突变的细胞的后代。肿瘤的肉眼观形态肉眼观肿瘤的形态多种多样,并可在一定程度上反映肿瘤的良恶性。     
        一般认为,肿瘤在本质上是基因病。各种环境的和遗传的致癌因素以协同或序贯的方式引起DNA损害,从而激活原癌基因和(或)灭活肿瘤抑制基因,加上凋亡调节基因和(或)DNA修复基因的改变,继而引起表达水平的异常,使靶细胞发生转化。被转化的细胞先多呈克隆性的增生,经过一个漫长的多阶段的演进过程,其中一个克隆相对无限制的扩增,通过附加突变,形成异质化,从而获得浸润和转移的能力,形成恶性肿瘤。
 
 
 
 
 
1、样本和组织、血液、细胞样本获取;
2、靶点与相关信号通路筛查和验证:
   1)靶点筛查:不同种类芯片,高通量测序等;
   2)信号通路:相关分析,如lncRNA、microRNA检测等;
   3)验证:体外验证和体内验证;
3、备选靶点的功能组学验证及下游通路筛选
   1)细胞水平针对特定的靶点,通过下调抑制和高表达,明确靶点的功能和肿瘤的关系;
2)动物水平通过KI/KO动物模型进行相关研究;
4、细胞水平靶点上下游的信号通路及机制研究
 
 
   1) 过高通量筛查(芯片,蛋白组学、pull-down、酵母双杂等)明确靶点的上下游启动子、miRNA、LncRNA和自噬等相关基因;
   2) 通过下调抑制和高表达,细胞水平验证靶点与相关分子通路的明确上下游关系;
5、动物水平靶点上下游的信号通路及作用机制研究
 
   1)通过特定信号通路激动剂/抑制剂,证明靶点与相关分子通路的明确上下游关系;
   2)进一步通过基因gain of function/loss of function证明靶点与相关分子通路关系,明确上下游关系(Tg/KO mouse);
 
6、靶点与上下游靶分子的精细调控关系检测
   1)蛋白间相互作用关系:通过Co-IP,pull-down;
   2)上下游转录调节:通过promoter-luciferase系统,EMSA等;
   3)针对分子作用区域研究:通过突变、截断体等研究相互作用结构域,比如蛋白互作的结构域查找;
7、药物筛选模型建立与药物筛选
明确肿瘤靶点及其相关通路的分子机制,根据靶点及其下游信号通路的特性,建立特异性的肿瘤药物筛选模型,通过高通量筛选平台(HTS),从化合物库中进行特异性药物的筛选。
 

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